熒光顯微鏡原理及應用
熒光顯微鏡是利用一個高發(fā)光效率的點光源,經過濾色系統(tǒng)發(fā)出一定波長的光(如紫外光3650入或紫藍光4200入)作為激發(fā)光、激發(fā)標本內的熒光物質發(fā)射出各種不同顏色的熒光后,再通過物鏡和目鏡的放大進行觀察。
這是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡,與上不同處是激發(fā)光從物鏡向下落射到標本表面,即用同一物鏡作為照明聚光器和收集熒光的物鏡。光路中需加上一個雙色束分離器,它與光鈾呈45°角,激發(fā)光被反射到物鏡中,并聚集在樣品上,樣品所產生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進入物鏡,反回到雙色束分離器,使激發(fā)光和熒光分開,殘余激發(fā)光再被阻斷濾片吸收。如換用不同的激發(fā)濾片/雙色束分離器/阻斷濾片的組合插塊,可滿足不同熒光反應產物的需要。此種熒光顯微鏡的優(yōu)點是視野照明均勻,成像清晰,放大倍數愈大熒光愈強。 落射熒光顯微鏡原理圖 |
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