第一節(jié) 金相顯微鏡
@e'5E^ O%ug@& S{ 前面講述了顯微鏡的光學原理以及附件,下面將分類介紹一下各類研究用鏡檢術。在材料研究領域,反射式明場顯微鏡得到廣泛應用,在此基礎上各種特殊的鏡檢方法也得到應用,如暗場,偏光,相襯,干涉,熒光,這些鏡檢方法在高檔顯微鏡上均能同時實現(xiàn)。
3S&U! 一. 明視野觀察(Bright field)
DU=dLE6-P; _Um d 明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,廣泛應用于病理、檢驗,用于觀察被染色的切 片,所有顯微鏡均能完成此功能。在此不再贅述。
w`DW(hXJ sIv)' 二. 暗視野觀察(Dark field)
)nd\7|5# X7g3 暗視野實際是暗場照明。它的特點和明視野不同,不直接觀察到照明的光線,而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此,視場成為黑暗的背景,而被檢物體則 呈現(xiàn)明亮的像。暗視野的原理是根據(jù)光學上的丁道爾現(xiàn)像,微塵在強光直射通過的情況下,人眼不能觀察,這是因為強光繞射造成的。若把光線斜射它,由于光的反 射,微粒似乎增大了體積,為人眼可見。暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點是不讓光束由下至上的通過被檢物體,而是將光線改變途徑,使其 斜射向被檢物體,使照明光線不直接進入物鏡,利用被檢物體表面反射或衍射的光形成明亮圖像。暗視野觀察的分辨率遠高于明視野觀察,最高達0.02— 0.004mm。
3<=G?of UQ.7>Ug+8s 三.相襯鏡檢法(Phase contrast)
+GAf O0 %xQ.7~ 在光學顯微鏡的發(fā)展過程中,相襯鏡檢術的發(fā)明成功,是近代顯微鏡技術中的重要成就。我們知道,人眼只能區(qū)分光波的波長(顏色)和振幅(亮度),對于無色通明的生物標本,當光線通過時,波長和振幅變化不大,在明場觀察時很難觀察到標本。
Z,.G%"i3C 8+Td-\IMk 相襯顯微鏡利用被檢物體的光程之差進行鏡檢,也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)像,將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹,即使是無色透明的物質也可成為清晰可見。這大大便利了活體細胞的觀察,因此相襯鏡檢法廣泛應用于倒置顯微鏡。
g%k` c1xrn4f@a 1. 相襯鏡檢法在裝置上與明場不同,有一些特殊要求:
+L=*:e\j U-^[lWn[@4 ( 1 ). 環(huán)狀光闌(Ring slit): 裝在聚光鏡的下方,而與聚光鏡組合為一體——相襯聚光鏡。它是由大小不同的環(huán)形光闌裝在一圓盤內,外面標有10X、20X、40X、100X等字樣,與相對應倍數(shù)的物鏡配合使用。
2+Wzf)tB v<9&B94z ( 2 ). 相板(Phase plate): 裝在物鏡的后焦平面處,它分為兩部分,一是通過直射光的部分,為半透明的環(huán)狀,叫共軛面;另一是通過衍射光的部分,叫“補償面”。有相板的物鏡稱“相襯物鏡”,外殼上常有“Ph”字樣。
v-! u\ Zx$ol;Yd 2. 相襯鏡檢法是一種比較復雜的鏡檢方法,想要得到好的觀察效果,顯微鏡的調試非常重要。除此之外還應注意以下幾個方面。
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+ZD7jK ( 1 ). 光源要強,全部開啟孔徑光闌;
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